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相关产品
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| Y3611-100T | 磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 300 | |
| Y3621-10T | 磁珠法高纯度质粒DNA大量提取试剂盒 | 10 T | 800 | |
| Y3696-50T | 无内毒素质粒DNA小提中量试剂盒 | 50 T | 400 | |
| Y3699-100T | 快速质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 320 | |
| Y3641-100T | 高纯度质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 250 | |
| Y3656-10T | 无内毒素质粒DNA大提试剂盒 | 10 T | 900 | |
| Y3657-50T | 无内毒素质粒DNA小提试剂盒 | 50 T | 350 | |
| Y3659-10T | 无内毒素质粒DNA中提试剂盒 | 10 T | 500 | |
| Y3660-10T | 质粒DNA中提试剂盒 | 10 T | 400 | |
| Y3694-10T | 质粒DNA大提试剂盒 | 10 T | 550 | |
| Y3114-100ML | LB液体培养基（无菌） | 100 mL | 30 | |
| Y3115-0910 | LB琼脂平板 | 10 plates | 90 | |
| Y3116-0910 | LB琼脂平板（卡那抗性） | 10 plates | 100 | |
| Y3117-0910 | LB琼脂平板（氨苄抗性） | 10 plates | 100 | |
| Y3118-0910 | LB琼脂平板（氨苄+卡那抗性） | 10 plates | 110 |
实验步骤
1、参考反应体系（10 μL反应体系）：
| Component | Volume |
| 2×In-Fusion Cloning Mix | 5 μL |
| Vector | X μL |
| DNA Segment | Y μL |
| Nuclease-Free Water | Add To 10 μL |
2、将装上述反应体系的EP管于冰水浴(冰水混合物)条件下孵育5-10 min，即可立即进行后续转化操作；
3、转化标准操作步骤：
a，从-80℃冰箱取出感受态细胞(如E.coli DH5α、E.coli Top10等)放置冰上解冻；
b，将反应后的样品加入到感受态中，手指轻轻拨动管底混匀，冰浴30 min；
c，然后产物放置于42℃水浴锅热激90 s，结束后，迅速置于冰上，冰浴2-5 min；
d，取900 μL无菌的SOC或LB培养基加入EP管中，混匀后，将EP管置于摇床上，220 rpm，37℃培养1 h复苏细菌（也可置于37℃培养箱静置培养1 h）；
e，根据实验需求，吸取不同体积已转化感受态细胞加到含有相应抗生素的LB固体培养基上，将细胞均匀涂布开，待液体完全吸收后将平板倒置于37℃培养箱，过夜培养；
4、阳性克隆鉴定：
挑取平板的上生长出来的单克隆菌落进行菌落PCR鉴定、或经培养后提取质粒酶切或PCR鉴定、或将提取的质粒直接测序分析鉴定。
不同类型质粒构建实验流程简图
1. 重组质粒构建实验流程简图
2. 单点基因突变重组质粒构建实验流程简图
3. 多片段插入重组质粒构建实验流程简图
