蛋白转膜

1. 制作转膜“三明治”

在盛有转膜缓冲液的WB专用切胶托盘（WSLQP）中操作，按 ‖ 正极（+，红色面）｜海绵（G6002）｜滤纸（G6001-16）｜PVDF膜（G6047-50-0.45）｜胶｜滤纸｜海绵｜负极（-，黑色面） ‖ 的顺序。也可以使用赛维尔WB免滤纸转膜海绵（G6048-2），省去传统“三明治结构”中的转膜滤纸，方便快捷高效。在整个过程中，推荐使用WB专用切胶铲（WCD-74）进行切胶，WB专用镊子（SVT-NZ）移取印迹膜，WB专用滚轮（SVT-GL）去除三明治结构中的气泡。

Tips1：“三明治结构”放置的顺序不正确，会影响蛋白质的转印效果，还有可能损坏转膜设备，建议使用WB免滤纸转膜海绵（G6048-2)，降低放置错误的概率。

 使用WB免滤纸转膜海绵时，“三明治结构”放置顺序

2. 设置转膜条件

在转印夹中依次放置好转印材料后，按照红对红，黑对黑的方向，将转印电泳仪（BVT-4/SVT-4）的转印夹放入转印芯（转印芯可同时放置4块转印夹）；加入免冰浴快速转膜缓冲液，设定恒流400 mA，转膜时间15-30 min（此条件针对1.0 mm厚的凝胶，如凝胶厚度为0.75 mm，适当减少转膜时间；如凝胶厚度为1.5 mm，适当延长转膜时间）完成蛋白转膜。

Tips1：WB电泳需设置电压条件，WB转印需设置电流条件，避免混用或弄错，造成实验失败。当需要同时进行WB电泳和WB转膜实验时，应使用双模组电源（SPW-DM）。

转膜后，PVDF膜很花，没有条带的原因？

1. PVDF膜未激活，使用PVDF膜转膜前，需要用无水乙醇或甲醇激活PVDF膜上的正电集团，这样才可以与带负电荷的蛋白结合；

2. 转膜的“三明治”结构太松，转膜海绵使用时间太长会变薄，要及时更换转膜海绵，转膜滤纸建议不要回收使用，如果“三明治”结构很松，可以左右两侧再多加一张转膜滤纸。