ELISA实验指南
利用抗原与抗体的特异性反应将待测物与酶连接，然后TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。根据颜色反应定量目标抗原或抗体含量。
该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| YM1168 | 组织样本匀浆（ELISA） | 样 | 10 | |
| YM1171 | ELISA检测(普通/按反应孔代测) | 反应 | 30 | |
| YM1172 | ELISA检测(高敏/按反应孔代测) | 反应 | 50 | |
| YM1160 | ELISA检测（整板代测） | 次 | 350 |
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一、ELISA样本准备方法及要求
全血取样方法及注意事项：眼眶采血时注意将眼眶周围毛发杂质清理干净避免溶血，采血时将血液滴入管内，避免血液挂壁导致溶血。心脏和静脉采血时建议用真空采血管。用注射器采血时抽取的速度不易过快，将针头拔掉后将血液从针管推出，避免压力过大造成溶血。
1、血清样本
按以上方法取全血样本，加到促凝管（黄色管盖，QX0028）或者无菌无酶的EP管（EP-150X-J）中，室温静置2小时，于2-8℃ 3000rpm/min离心15min，取上清放于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
2、血浆样本
按以上方法取全血样本置于肝素抗凝管内（绿色管盖，QX0012）或EDTA抗凝管内（紫色管盖,QX0002），采血量为抗凝管标注体积的80%-100%，血量勿超过抗凝管标注体积否则抗凝效果不佳，血量不少于80%标注体积，否则样本会被抗凝剂稀释。轻轻颠倒混匀，30分钟内于2-8℃ 3000rpm/min离心15min，取上清放于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
4、动物组织样本
①动物处死后5min内取样，全程冰上操作，先取易降解的组织，如胰腺、肠、胃等，再取其它组织，组织块至少取50mg以上（黄豆大小）。组织取好后用预冷的PBS轻轻漂洗掉样本表面的血污，例如心、肝、脾、肾等血污较多的组织，可用预冷PBS清洗多次，直至血污清洗干净，用滤纸吸干组织表面液体，立即放入EP管或冻存管中-80℃保存。
②肠，胃，血管，食管，子宫等标本，取材后立即把组织切开用预冷PBS清洗多次，去除内容物，用滤纸吸干组织表面液体，立即放入EP管或冻存管中-80℃保存。
③刚孵化的斑马鱼离心后至少提供黄豆大小的数量。
④视网膜需单独剥离，小鼠至少需要4个视网膜合并，大鼠至少需要2个视网膜合并。
⑤皮肤样本需去净毛发。
如有特殊特定部位请提供详细取材要求或参考图。
5、细胞样本
贴壁细胞：①培养好的细胞弃培养基，加入PBS，用细胞刮沿一个方向轻轻刮下细胞，切记不要反复刮，避免细胞刮破。
②细胞液收集至离心管内，4℃低速离心（不超过3000rpm）5min，去上清，收集细胞沉淀，细胞沉淀要有黄豆大小。
悬浮细胞：①将细胞及培养基一起吸入离心管中，4℃低速离心（不超过3000rpm）5 min，去上清，收集细胞沉淀。
②加入1mL PBS溶液重悬细胞，将细胞转移到1.5mL离心管中，4℃低速离心（不超过3000rpm）5min，去上清，收集细胞沉淀，细胞沉淀要有黄豆大小。
细胞上清：取细胞培养基于2-8℃，3000rpm/min离心15min取上清，于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
备注：不要寄送培养板或培养瓶，运输过程中细胞容易脱落且造成细胞活力下降，培养板有漏液风险，造成样本污染。
6、匀浆液
使用合适的缓冲液（PBS、生理盐水等）进行匀浆裂解，其中组织质量和试剂体积比例为1:9，即100mg组织加人900uL缓冲液于研磨管（HT-200-M）中，研磨仪（SWE-FP）低温匀浆裂解后，4℃，10000 g 离心 10-15 min，取上清用于后续检测。
二、检测内容和详细说明
1、检测项目和对应的样本类型
检测项目 样本类型 | 手动生化 | 上机生化 | 凝血 | 血常规 | 尿常规 | ELISA |
组织标本 | √ | － | － | － | － | √ |
贴壁细胞 | √ | － | － | － | － | √ |
细胞上清 | √ | － | － | － | － | √ |
血清 | √ | √ | － | － | － | √ |
血浆（肝素抗凝） | √ | √ | － | － | － | √ |
血浆（枸橼酸钠抗凝） | － | － | √ | － | － | － |
全血（EDTA-K2 抗凝） | － | － | － | √ | － | － |
尿液 | √ | － | － | － | √ | √ |
血浆（EDTA）） | － | － | － | － | － | √ |
不同检测对血液样本要求不同，需使用不同类型的抗凝管
肝素 | EDTA | 枸橼酸 | |
抗凝机制 | 肝素可增强抗凝血酶III活性、抑制凝血酶原激酶形成、干扰凝血酶作用、防止血小板聚集进而起到抗凝作用。 | EDTA能与血液中Ca2＋结合成螯合物，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。EDTA的盐类有钾、钠、锂盐，临床上全血细胞计数一般使用EDTA钾盐。 | 枸橼酸盐中的枸椽酸根离子与血中Ca2＋生成难解离的可溶性络合物枸椽酸钙，此络合物易溶于水但不易解离，使血中Ca2＋减少，凝血过程受到抑制，从而阻止血液凝固。 |
适用范围 | 肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。 肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做血常规检测。 肝素对金属离子及酶活影响较小，故适用于各类生化检测。 | EDTA可螯合样本中 Ca2+、Mg2+等金属离子，从而使肌酸激酶、碱性磷酸酶等酶活降低。故不适用于各类生化检测。 EDTA盐对血细胞形态、血小板计数影响很小，适用于血常规检查，尤其是血小板计数。 | 枸椽酸根离子与血中Ca2＋络合，影响酶活，且碱性强影响血细胞形态，故不适用于血常规和各类生化检测。 其对凝血因子和凝血酶影响较小，故适用于血凝试验。 |
2、血液样本可能出现的问题及原因
样本溶血（样本颜色可以看见偏红），样本乳糜（样本像牛奶），样本凝块（有果冻一样的胶状物质），没有流动性（EP管倒过来不会流动），以上情况都会影响实验结果，可能测值不准。
导致溶血的可能原因：
1、注射器采血时抽血太快；将血液从注射器中打出时没有拔掉针头。
2、眼眶采血时有杂质污染导致的溶血。
3、取血后未静置，直接离心导致果冻状上清，吸取容易吸到底层红细胞导致溶血。
4、接触水、强力振荡、操作不慎等引起。
导致乳糜的可能原因：
1、动物采血前未禁食，一般采血前需要禁食不禁水8-12h。
2、平时饮食油脂量，造成血液中脂肪含量升高。
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