成像检测

1、化学发光

将ECL A和B液按照 1:1比例混合好后备用，将洗脱完的PVDF膜取出放在吸水纸上，稍微吸干膜上面的液体，将膜放入混合好的ECL发光液中，让液体完全浸没膜，待反应1min之后，将膜取出放入化学发光仪托盘上，按照预设程序开始化学发光，曝光完成之后，保存原始图为TIFF格式。

Tips1：避免直接使用使用灵敏度较高的ECL发光液，一旦出现过曝，就算更换成灵敏度较低的ECL，也无法使条带上的膜恢复正常，还可能出现膜反白的现象。推荐使用ECL发光液组合装（G2161-200ML）。        

2、成像检测

利用多功能成像系统（SCG-W3000 PLUS或SCG-W5000）进行成像检测：点击化学发光功能，设置文件名和结果存储位置后，选择曝光模式（自动曝光/手动曝光）和拍摄模式（高质量/标准/高灵敏），点击拍摄

实验场景一：信号较弱的条带，如何一次就完成曝光，获得好的效果图？        

可以在自动曝光的基础上，直接增加曝光时间，即可累加条带信号；

实验场景二：一张膜中检测两个抗体指标，条带信号强弱不同时，一次曝光无法得到两个指标条带都满意的结果？

可以在曝光结束后，通过调整时间轴至不同位置，获得曝光时间内不同时间的条带信号结果；

实验场景三：WB曝光结束后，对条带信号强弱不满意？        

可以随时在电脑上利用分析软件对结果进行调整并输出；

实验场景四：多张膜曝光，需要在一起上逐个的曝光每张膜，长时间操作，机器不够用？        

可以将多张膜同时放进仪器内进行曝光，设置较长的曝光时间，尽量让所有膜上的条带全部曝光出来，在电脑上用分析软件进行调整；

实验场景五：手动曝光时，无法精准设置时间，得到合适的效果图？        

可以实时观察到条带信号的变化，曝光过程中如果看到满意的条带，可以随时手动点击停止曝光。

问题：曝光时PVDF膜全黑？

可能原因及解决办法：

原因：一抗二抗浓度高、没有封闭好、没洗干净、ECL灵敏度过高

解决办法：降低一抗二抗稀释比、换封闭液、加强洗涤、稀释或选用灵敏度较低的ECL

问题：WB条带粘连？

可能原因及解决办法：

1、样本上样量大，需要降低样本上样量；

2、一抗抗体浓度高，降低一抗抗体浓度。

问题：使用超敏ECL后条带反白？

可能原因及解决办法：

原因：目的条带荧光过强，快速消耗发光底物，底物消耗完之后就会出现反白的情况。

解决办法：降低样本上样量或者降低一抗、二抗浓度或者使用灵敏度低的ECL发光液。