MTT

实验介绍

MTT常用于检测细胞毒性和细胞增殖，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，死细胞无此显色反应。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶甲臜形成的量与细胞数成正比。

传统MTT检测方法中，由于产生的甲臜是不溶于水的，需要先将上层含MTT底物的反应液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易造成实验的重复性、可现性较差。本试剂盒提供特殊的甲臜溶解剂，检测时无需移除原有的含MTT底物反应液，而是直接加入甲臜溶解剂，即可溶解甲臜，从而避免移除原有反应液导致的误差。

操作步骤

1. 贴壁细胞处理：待细胞贴壁后，按照实验设计进行加药、转染等处理；

2. 细胞活性检测：每孔加入20 μL MTT工作液，在细胞培养箱内孵育4 h；

3. 去除上清：完成孵育后，会发现孔板底部出现少量紫色结晶，可在40倍显微镜下观察。用移液枪小心吸除孔板内上清溶液（切勿吸到底部紫色结晶）；

4. 显色：向孔板中加入100 μL DMSO，37℃孵育15 min左右（可用手指轻微敲击板底小幅度震荡），待紫色结晶全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些；如果紫色结晶较大较多，可适当延长溶解时间；

5. 检测：在波长490 nm或570 nm处测定吸光度。如无570 nm滤光片，可使用560-600 nm滤光片。