蛋白电泳

将凝固好的蛋白胶安装到垂直电泳仪（BVE-4或者SVE-4）中，拔掉梳子，如果点样孔弯曲，可用上样针拨正，倒入电泳缓冲液，如果此时缓冲液中有较多泡沫，可以使用电泳专用消泡剂（G2189-100ML），对准泡沫，按压喷洒至无气泡既可。之后可进行上样，Marker孔加入5-10μL蛋白Marker，样本加入蛋白上样缓冲液处理后进行上样（蛋白总上样量30-50μg）。按照标记，将垂直电泳仪正负极连接至电泳电源（SPW-DM），将电压调至 60-90V；样品进入分离胶之后，将电压调至120-150V，等到溴酚蓝指示剂距离胶最底部大约1cm，即可终止电泳（想要更快完成电泳实验，或对小分子蛋白分离要求更高，建议选用G2149-1L SWE快速高分辨电泳缓冲液，可全程200-250 V恒压，约30min可完成电泳，大大节约时间，并且对小分子蛋白分离效果更好）。

图1：不同蛋白marker的指示范围

Tips1：选择蛋白Marker时，要确保其分子量范围能够覆盖目标蛋白的大小，并根据是否需要实时监测或精确分子量来选择预染或可显影蛋白Marker（G2086-250UL）。赛维尔蛋白Marker系列种类齐全，浓度高，条带清晰锐利。

Tips2：蛋白上样缓冲液有气味，是因为含有毒、刺鼻的二硫苏糖醇（DTT）、巯基乙醇，建议选用无气味的蛋白上样缓冲液（G2075-10ML），能减少试剂对身体的危害。

Tips3：在进行蛋白上样时，应保证点样均匀、准确。建议WB点样吸头（TP-10WB-C），专用于WB实验点样，能有效避免挂壁，样本吸附少，上样量更准。加长的设计，也能更精确地将样本点入孔中。

Tips4：不同凝胶体系，搭配不同电泳缓冲液。电泳缓冲液和凝胶体系不适配时，可能导致蛋白质迁移异常、条带丢失或淡化，建议使用即用型电泳缓冲液（G2149-1L）或包含所有组分、无需调节pH的缓冲液粉剂，避免因为配制过程出错，造成实验失败。

Tips5：WB电泳时，应注意垂直电泳仪电极正负极安装正确，电极安装反会造成，蛋白反向迁移，影响实验结果。建议使用正负极标记易区分的垂直电泳仪（BVE-4）。

1. 恒压200V电泳时，实时电流很高（例如：500mA）

   原因：外槽电泳液过多，造成了短路，电泳会直接从正极到负极。

   体现：恒压电泳时，实时电流值很高、蛋白泳动速度过慢，甚至出现电极电解。

   解决方案：        

   1、赛维尔SVE-4/BVE-4电泳槽进行了升级，外槽增加溢液孔，当外槽电泳液加入过多时，会直接流出，保证内、外槽液面低于电极；

                   

2. 电泳时往内槽加入电泳液，让内槽电泳液过满，溢到外槽，外槽电泳液的液面是内槽液面的一半即可停止加入。

3. 恒压200V电泳时，实时电流很低（例如：40mA）

   原因：内槽电泳液偏少，造成了断路、电流不均一。

   体现：恒压电泳时，实时电流值很低、蛋白泳动速度过慢，出现条带歪斜。

   解决方案：电泳时往内槽加入电泳液，让内槽电泳液过满，溢到外槽，外槽电泳液的液面是内槽液面的一半即可停止加入。

4. 同一管变性蛋白，在SWE高分辨电泳缓冲液中出现溴酚蓝分层的现象，而使用普通电泳缓冲液则没有出现这种现象？

   溴酚蓝出现分层是正常的，SWE高分辨电泳缓冲液分辨率高，适合分离一些小分子量蛋白，也就是下面的小分子量的条带会分离得比较开，溴酚蓝的分子量比较小，在这种分离度下分离得更开，就出现了2-3条的染色带；另外，溴酚蓝只是一个指示剂，不能代表蛋白条带的真实情况，只需重点关注曝光后的结果图就行。

5. 使用不同公司的预染marker同时电泳 ，marker指示结果不同

   1、市面上的预染蛋白marker都不是单纯的蛋白，蛋白上面有染料的修饰，所以指示的分子量本身就是“~”约等于，不是精确大小，有一定误差在里面，这个是正常现象，跟胶体系、胶浓度、电泳缓冲液有关。

   2、可显影蛋白marker G2086中有4条预染蛋白条带，8条无染料修饰的蛋白条带，没有染料修饰的条带所指示的分子量更为精准。

6. 边缘的蛋白marker条带变歪

   原因：        

   样本中蛋白浓度高，挤压蛋白marker，marker变形；

   解决办法：        

   1、建议稀释样本或者降低样本上样体积；

   2、建 议 左 右 两 侧 空 的 泳 道 加1*loading，上样体积和样本的上样体积一致。