拓扑克隆
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| Y3033-25T | pSWE-Topo Zero Cloning Kit | 25 T | 500 | |
| Y3641-100T | 高纯度质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 250 | |
| Y3656-10T | 无内毒素质粒DNA大提试剂盒 | 10 T | 900 | |
| Y3657-50T | 无内毒素质粒DNA小提试剂盒 | 50 T | 350 | |
| Y3659-10T | 无内毒素质粒DNA中提试剂盒 | 10 T | 500 | |
| Y3660-10T | 质粒DNA中提试剂盒 | 10 T | 400 | |
| Y3694-10T | 质粒DNA大提试剂盒 | 10 T | 550 | |
| Y3611-100T | 磁珠法质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 300 | |
| Y3621-10T | 磁珠法高纯度质粒DNA大量提取试剂盒 | 10 T | 800 | |
| Y3696-50T | 无内毒素质粒DNA小提中量试剂盒 | 50 T | 400 | |
| Y3699-100T | 快速质粒DNA小量提取试剂盒 | 100 T | 320 | |
| Y3114-100ML | LB液体培养基（无菌） | 100 mL | 30 | |
| Y3115-0910 | LB琼脂平板 | 10 plates | 90 | |
| Y3116-0910 | LB琼脂平板（卡那抗性） | 10 plates | 100 | |
| Y3117-0910 | LB琼脂平板（氨苄抗性） | 10 plates | 100 | |
| Y3118-0910 | LB琼脂平板（氨苄+卡那抗性） | 10 plates | 110 | |
| YGQ-08 | PCR-8联管压/起盖器 | 个 | 150 | |
| YLX-1024F | 离心机 微量高速低温型 | 台 | 26000 | |
| YT-9600 | PCR仪 | 台 | 28000 | |
| YVL-2 | 一体式水平电泳仪 （电泳槽＋蓝光仪） | 台 | 1500 |
| 零背景Topo克隆与TA克隆的比较 | |||
| 类型 | 反应温度 | 反应时间 | 阳性率 |
| 零背景Topo（G3022-25T） | 室温（20-37℃） | 5-10 min | ☆☆☆☆☆ |
| TA克隆 | 16℃ | 过夜 | ☆☆☆☆ |
1 、PCR产物的准备
（1）引物不能磷酸化；
（2）PCR反应使用高保真及Taq DNA Polymerase均可（推荐G3304-01、G3305-01）；
（3）PCR产物推荐电泳后使用凝胶回收试剂盒进行纯化（推荐G3631-100T）。
2、参考反应体系：
| Component | Volume |
| pSWE-Topo Zero Vector (50 ng/μL) | 1 μL |
| 基因片段 | 0.5-4 μL |
插入片段推荐用量：载体与片段摩尔比=1:10-1:3。可以粗略地按照1 kb片段加入50 ng的量计算。如果构建基因文库可适当扩大反应体系。
3、按上述参考反应体系轻轻混合载体与基因片段，室温（20-37℃）反应5-10 min，将离心管置于冰上。
4、转化：a.在反应体系中加入50-100 μL克隆感受态（或将反应产物加入50-100 μL克隆感受态中），轻轻混匀，冰浴30 min；b.将转化体系立即于42℃热激45 s，立即置于冰上2-3 min；c.在转化体系中加入200 μL平衡至室温的SOC或LB培养基，200 rpm、37℃孵育1 h；d.取200 μL菌液涂布抗性平板，37℃倒置培养过夜（为得到较多克隆，可以离心后去掉部分上清，将菌液全部涂布抗性平板）。
5、阳性转化子检测：
a. 菌落PCR鉴定阳性克隆：挑取单克隆至10 μL无菌水中，涡旋混合，然后取1 μL混合液作为PCR模板，M13 Forward Primer和M13 Reverse Primer作为通用引物，进行菌落PCR鉴定阳性克隆。（推荐G3304、G3305；PCR反应体系及程序参考相应产品说明书，阳性克隆PCR扩增片段＞100 bp）
b. 酶切鉴定阳性克隆：挑取单克隆接种于适量抗性液体培养基中，220rpm、37℃过夜培养。小量提取质粒，用适宜的限制性内切酶进行酶切，凝胶电泳鉴定阳性克隆。
c. 测序鉴定阳性克隆：使用M13 Forward Primer，M13 Reverse Primer引物测序并分析。
