样本研磨

贴壁细胞：去除细胞培养液，用适量预冷PBS清洗细胞，尽量将PBS吸除干净。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，轻轻晃动使板底细胞充分接触RNA提取液，移液枪吹打细胞，使细胞裂解，然后转移至离心管中，室温静置5 min。

悬浮细胞：离心收集细胞，尽量将上清液吸除干净，每1-10×10⁶个细胞加入1 mL RNA提取液，移液枪吹打数次使细胞裂解，室温静置5 min。

组织样本：组织剪切成小块（黄豆大小），放入预冷的匀浆器内，每100 mg组织加入1 mL RNA提取液（推荐G3013-100ML），匀浆至无可见组织块。

Tip：可选步骤，4℃，12000 g离心10 min使组织碎片分离，转移上清至新的离心管中。

血液样本：新鲜血液样本每200 μL加入800 μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10 min；如果是组织RNA稳定保存液（G3019-100ML）保存的血液样本，先经4000-5000 rpm离心5 min，弃上层组织RNA稳定保存液，再加入800 μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10 min。

（1）RNA降解是什么原因？

解决方案：a、样本保存不当：尽量取新鲜的组织样本，然后用液氮迅速冷冻，避免样本反复冻融；b、操作环境有RNase污染：用RNase清除液（推荐G3032-250ML）对塑料表面、玻璃表面、实验台面、仪器塑料玻璃表面、不锈钢金属表面等进行清洁。

（2）RNA提取量过低是什么原因？
解决方案：a、样本研磨或匀浆不充分：若使用研磨仪（推荐SWE-FP），可适当调整研磨频率、时间、次数，研磨时样本需一直保持在低温环境，避免温度过高核酸降解。若使用液氮手动研磨，需保证样本均匀粉碎；b、样本保存不当：样本保存时间过长，或者反复冻融样本；c、洗脱不充分：可将RNA溶解液（推荐G3030-10ML，能不可逆性灭活RNA溶液中的RNase）加热至65℃滴在纯化柱膜中间，静置后进行二次洗脱。