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实验类型

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代谢组学/蛋白组学

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动物

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免疫荧光

免疫组化

DMPK

分子克隆

超微病理

生化/ELISA

免疫荧光

实验介绍

免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

取材固定

货号	名称	规格	价格
YXTZ12	小动物解剖器械套装	8件	500
YXTZ13	小动物手术器械套装	18件	1800
Y3092-100ML	新鲜肌肉组织保存液	100 mL	100
Y1131-500ML	卡诺氏固定液（用于固定肠道粘液）	500 mL	50
Y1141-50ML	神经组织固定液	50 mL	150
Y6019-40ML	标本瓶	20个/袋（40 mL/个）	20
Y1215-100ML	破膜液	100 mL	30

1、取材时要选择足够锋利的刀片，用镊子夹取样本时，需要尽量小心，避免挤压样本

注意：如果一只动物同时取多种器官，优先取消化器官，其次取中枢神经系统器官（脑，脊髓等），皮肤、肌肉等可放到最后取

2、取材后，要将样本迅速放入固定液中，一般固定液是组织体积的20倍及以上，需确保组织充分固定

3、对于细胞样本，固定后（可选通用性组织固定液G1101进行固定）需要对细胞进行通透处理，能使细胞膜上产生小孔以利于染料或抗体进入细胞。

注意：

1、取样后尽量保证样本离体后5 min内放入到合适的固定液内，推荐可以使用单支装通用型组织固定液（G1101），单支装即开即用，避免分装。

2. 固定运输过程中，需要选择合适的固定容器，要保证组织在容器内不贴壁，挤压（标准：可轻晃标本瓶，看组织在容器内是否能自由移动）

包埋切片

货号	名称	规格	价格
YP1012	组织石蜡包埋	样	10
YP1013	细胞石蜡包埋	样	20
YP1021	石蜡切片	张	5
YP1136	石蜡封片	张	2
YP1018	OCT包埋	样	10
YM-24	石蜡切片机	台	62000
YF-1	包埋框（单格）	250个/包	150
YF-1P	包埋框（单格加深款）	150个/包	150
YF-2	包埋框（2分格）	250个/包	150
YF-4	包埋框（4分格）	250个/包	150
YMDZ-15*15-5	五连排包埋框底座	15155 mm	200
Y6023-1	粘附载玻片（石蜡切片）	50片/盒	45
Y6023-2	粘附载玻片（冰冻切片）	50片/盒	45
Y6028-20	粘附载玻片（石蜡切片）（特规大玻片）	20片/盒	100
Y6069-20	粘附载玻片（冰冻切片）（特规大玻片）	20片/盒	100
Y6089-50	粘附载玻片（骨组织专用）	50片/盒	45
Y6112	载玻片专用记号笔	支	20
YKH-001	蜡块盒	个（可放18个蜡块/盒）	5

石蜡切片和冰冻切片都适用于大部分实验，针对常规染色，组化或是荧光优先推荐选择石蜡切片，因为石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好，并且对抗原基本无影响

注意：如果标本已经放在-80℃冰箱冷冻了之后又想要做石蜡切片，将标本取出来千万不要解冻，直接放于固定液内固定(在固定液内边解冻边固定)。

脱蜡

脱蜡水化可以确保抗体等其他试剂能够充分与组织中抗原等结合发生反应

注意事项：

1.脱蜡液一定要完全浸没组织切片，为保证脱蜡质量，可以分两步进行，确保完全脱蜡

2.环保型脱蜡透明液冬天温度较低可能会影响脱蜡效果，可以加热到37℃进行脱蜡

抗原修复

货号	名称	规格	价格
Y1213-250ML	20×柠檬酸抗原修复液（pH 6.0）	250 mL（20×浓缩液）	60
Y1217-250ML	20×Tris-EDTA抗原修复液（pH 8.0）	250 mL（20×浓缩液）	60
Y1214-250ML	20×Tris-EDTA抗原修复液（pH 9.0）	250 mL（20×浓缩液）	60

组织中部分抗原在固定过程中会发生蛋白之间交联封闭作用，从而失去抗原性，通过抗原修复，将抗原重新暴露，更利于抗原抗体的结合，增强特异性染色

注意事项：

1. 抗原修复方法有很多种，根据组织类型特点可以选择不同的方法，有些适合热修复，有些适合酶解修复。

2. 应用热修复时，需要注意修复液的pH，常用柠檬酸，pH 6.0和EDTA pH 8.0；抗原修复强度：EDTA pH9.0＞EDTA pH8.0＞柠檬酸

画圈

货号	名称	规格	价格	操作
Y6111	免疫组化笔(Liquid Blocker PAP Pen)	支	240

用免疫组化笔在载玻片上组织周围画圈，可提供一个薄膜状的疏水性屏障，在不影响实验结果的前提下可有效减少试剂的使用量，并能避免组织表面试剂流失造成的干片情况。

组织自发荧光淬灭A

货号	名称	规格	价格	操作
Y1232-5ML	组织自发荧光淬灭剂	5 mL×2	100

组织自发荧光淬灭剂可有效减少组织自发荧光，提高免疫荧光检测的信噪比。其中A液有效成分为二价铜离子，可有效减少红细胞的自发荧光，B液有效成分为苏丹黑，能显著降低脂褐素引起的自发荧光。

免疫标记前的自发荧光淬灭：组织切片在经过抗原修复以后，用组化笔画圈圈出组织，然后滴加组织自发荧光淬灭剂A液覆盖组织室温孵育30 min，纯水洗5 min。

封闭

货号	名称	规格	价格
Y1219-5ML	封闭用正常山羊血清（原液）	5 mL	15
Y1220-5ML	封闭用正常兔血清（原液）	5 mL	25
Y1228-5ML	封闭用正常驴血清（原液）	5 mL	40
YC305017-100g	牛血清白蛋白 BSA 进口	100 g	950
YC305021-100g	牛血清白蛋白 BSA 国产	100 g	400

封闭剂能够封闭组织切片上的非特异性结合位点，从而避免抗体与这些非特异性位点的结合。这有助于减少假阳性结果的出现。

封闭剂一般推荐使用二抗同种属来源的动物血清，例如山羊血清，兔血清，驴血清以及牛血清白蛋白(BSA)等。

注意事项：

1.血清孵育完成后不需要进行清洗，轻轻甩掉多余血清即可滴加一抗

2.孵育时可使用免疫组化笔先在组织周围画圈，避免液体流失导致干片

一抗孵育

二抗孵育

货号	名称	规格	价格
YB21312	Cy3标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	150
YB21313	Cy3标记山羊抗大鼠IgG	100 μL	150
YB21314	Cy3标记山羊抗兔IgG	100 μL	150
YB21412	Cy3标记驴抗小鼠IgG	100 μL	280
YB21414	Cy3标记驴抗兔IgG	100 μL	280
YB21415	CY3标记驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB27312	Cy5标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB27314	Cy5标记山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB22312	FITC标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	150
YB22313	FITC标记的山羊抗大鼠IgG	100 μL	150
YB22314	FITC标记的山羊抗兔IgG	100 μL	150
YB22412	FITC标记的驴抗小鼠IgG	100 μL	280
YB22414	FITC标记的驴抗兔IgG	100 μL	280
YB22415	FITC标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB25312	Alexa Fluor 488标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB25314	Alexa Fluor 488标记的山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB25415	Alexa Fluor 488标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB28312	Alexa Fluor 594标记山羊抗兔IgG	100 μL	280
YB28314	Alexa Fluor 594标记山羊抗小鼠IgG	100 μL	280
YB23415	HRP标记的驴抗山羊IgG	100 μL	280
YB23313	HRP标记的山羊抗大鼠IgG	100 μL	120
YB23314	HRP标记的山羊抗兔IgG	100 μL	120
YB23312	HRP标记的山羊抗小鼠IgG	100 μL	120

注意事项：

二抗的选择可以根据一抗来源进行选择：例如一抗来源是小鼠来源，可以选择山羊抗小鼠二抗；如果一抗来源是兔来源，可以选择抗兔二抗

TSA荧光染料

货号	名称	规格	价格
Y1268-50T	TSAPLus荧光六标七色染色试剂盒	50 T	6000
Y1261-25UL	iF440-Tyramide	25 μL	1200
Y1262-25UL	iF546-Tyramide	25 μL	1200
Y1263-25UL	iF700-Tyramide	25 μL	1200
Y1269-25UL	iF750-Tyramide	25 μL	1400

TSA技术主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应，产生大量的酶促反应，该产物能与周围的蛋白残基（包括色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基）结合，在抗原-抗体结合部位形成大量的荧光素沉积，实现信号放大。

注意事项：

1.与荧光二抗相比，TSA试剂盒有更高的灵敏度和更强的信号。因此一抗使用浓度需降低，一般在抗体说明书建议的稀释比基础上再扩大5-10倍，以减少非特异性结合导致的背景荧光。

2.如进行多重荧光标记，建议先孵育多抗，后孵育单抗；先孵育高丰度目的蛋白对应的抗体，再孵育低丰度目的蛋白对应的抗体。

3.如背景荧光较强，建议增加组织自发荧光淬灭步骤。

如果多重荧光染色，重复步骤“一抗孵育”,“二抗孵育”,“TSA荧光染料”

复染细胞核

货号	名称	规格	价格
Y1032-10ML	PI染液	10 mL	45
Y1022-10ML	Hoechst 33258染液（即用型）	10 mL	45
Y1138-1ML	Hoechst 33342染色液（1 mg/mL）	1 mL	150

复染的主要目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。具体来说，复染可以使各种细胞结构显示出来，便于观察和分析。在免疫荧光实验中，常用的复染剂是DAPI，复染的主要目的是特异性的对细胞核进行染色，可以使组织结构，组织轮廓显示出来，从而更好地对目标蛋白进行定位，便于观察和分析。

组织自发荧光淬灭B

货号	名称	规格	价格	操作
Y1232-5ML	组织自发荧光淬灭剂	5 mL×2	100

免疫标记后的自发荧光淬灭：滴加组织自发荧光淬灭剂B液覆盖组织室温避光孵育5 min，流水冲洗3 min。

封片

货号	名称	规格	价格	操作
Y1418-25ML	抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）	25 mL	300

抗荧光淬灭封片剂是一种用于减缓荧光淬灭的封片试剂，用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭，可最大限度延长荧光持续时间，用于荧光组织和细胞样品的封片保存

注意事项：

1. 荧光物质均易发生淬灭，在使用抗淬灭封片剂的情况下可以延长荧光持续时间，减缓荧光淬灭，但封片后的片子宜4℃避光保存，推荐使用避光切片盒。并尽快拍照。

2. 含DAPI，可同时完成细胞核染色和封片，使用时只需在封片时用移液枪滴一滴本产品于样本上，盖上盖玻片即可完成操作。