Masson三色染色法（亮绿复染）
试剂制备
Masson复合染色液：酸性复红1g，丽春红2g，橘黄G2g，0.25%醋酸300ml.
亮绿染色液：亮绿0.2g，蒸馏水100ml，冰醋酸0.2ml.
染色步骤：
1、 Masson复合染色液5min.
2、 0.2%醋酸水溶液稍洗2次（水洗）。
3、 5%磷钨酸5-10min。
4、 0.2%醋酸水溶液浸洗2次（水洗）。载玻片/盖玻片处理
1. 聚醚酰亚胺或多聚赖氨酸在室温下包被盖玻片1小时。
2. 无菌水冲洗盖玻片（3次，每次5分钟）。
3. 可将盖玻片干完全干燥，并在紫外光下消毒至少4小时。
4. 在玻片上种植细胞，或准备细胞离心涂片器，或做好涂抹准备。
5. 磷酸盐缓冲液（ PBS ）进行简短的冲洗。
第一步：细胞固定
• 用预冷的甲醇、丙酮（ 1-10分钟），或3-4 ％甲醛（PBS的pH值7.4）室温（或者-20 ℃)固定细胞片15分钟。
• 用预冷的PBS冲洗细胞片两次。透化：如果目的蛋白是胞内表达，透化细胞非常重要。注：丙酮固定标本不需要透化。
• 用含0.25% Triton X-100或100 μM 洋地黄皂苷 or 0.5% 皂苷的PBS室温孵育标本10分钟。Triton X - 100是目前最流行的通透剂，可提高抗体的渗透程度。但这不适合与膜相连抗原的使用，因为它会将膜破坏。
• PBS 清洗细胞片3次，每次5分钟。
第二步：封闭和孵育
• PBST 孵育细胞（1 ％牛血清白蛋白），室温30分钟，以封闭抗体非特异性结合位点（封闭液也可以是1 ％明胶或10 ％的血清，此血清需来自二抗产生的物种体内）。
• 加入一抗在湿盒内孵育细胞片（在使用含1% BSA PBST稀释抗体的），室温1小时或4 ℃过夜。
• 缓慢倒出溶液，PBS清洗细胞片的3次，每次5分钟。
• 加入含1 ％BSA的二抗稀释液，室温避光孵育1小时（避光）。
• 缓慢倒出二抗溶液，PBS清洗3次，每次5分钟（避光）。
第三步：复染
• 在0.1-1 μg/ml Hoechst or DAPI (DNA染液)下孵育细胞1分钟。
• PBS 清洗。
第四步：封片和观察
• 滴加一滴封片剂封片剂质，盖上盖玻片。
• 用指甲油密封盖玻片，以防止干燥和显微镜观察时移动

5、亮绿染色液5min。0.2%醋酸水溶液洗2次。
6、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶固封。
结果：生长板细胞外基质呈现绿色；骨骺次级骨化中心结构和干骺端骨小梁结构呈现红色。

AB (Alcian Blue) -PAS(Periodic Acid-Schiff) 染色-阿尔辛蓝-过碘酸雪夫
染色步骤：
1、蒸馏水浸洗1min。
2、入3%醋酸液3min。
3、入阿尔辛蓝染液30min。
4、入3%醋酸液3min。
5、蒸馏水冲洗3次。
6、 0.5%高碘酸氧化10min。
7、流水冲洗，蒸馏水浸洗2次。
8、在雪夫液10-20min。
9、流水冲洗2min，蒸馏水洗2次。
10、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：生长板细胞外基质呈现蓝色；骨骺次级骨化中心结构和干骺端骨小梁结构呈现紫红色或红色。