流式细胞术

流式细胞术（FC）
细胞表面染色基本操作过程
直标法：
全血标本（EDTA抗凝）
1. 在Facoll管中加入一定体积的直标抗体，加入50/100ul全血，
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟
4. 1000rpm 离心5分钟
5. 弃上清，混匀，加入2ml　PBS，1000rpm离心5分钟
6. 加入0.5-1ml　PBS重悬，即可上机检测
细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板）
1. 在Facoll管中加入一定体积的直标抗体，加入1×106的细胞
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
4. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
间标法
全血标本（EDTA抗凝）
1. 在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体，加入50/100ul全血，
2. 混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入1 ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟
4. 1000rpm 离心5分钟
5. 弃上清，混匀，加入2ml　PBS，1000rpm离心5分钟
6. 加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟
7. 加入1-2ml　PBS，1000rpm离心5分钟
8. 加入0.5-1ml　PBS重悬，即可上机检测
细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板）
1. 在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体，加入1×106的细胞
2. 混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
4. 弃上清，加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟
5. 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟
6. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
 
细胞内抗原染色基本操作过程
直标法
全血标本（EDTA抗凝）
1. 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入50/100ul全血，
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟
4. 1000rpm 离心5分钟
5. 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
6. 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟
7. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
8. 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟
9. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
10. 加入直标细胞内抗体抗体，室温避光孵育15-30分钟
11. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
12. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板）
1. 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入1×106的细胞
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
4. 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟
5. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
6. 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟
7. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
8. 加入直标细胞内抗体抗体，室温避光孵育15-30分钟
9. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
10. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
间标法
全血标本（EDTA抗凝）
1. 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入50/100ul全血，
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟
4. 1000rpm 离心5分钟
5. 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
6. 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟
7. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
8. 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟
9. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
10. 加入一定体积的纯化抗体，混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书）
11. 1000rpm 离心5分钟
12. 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
13. 加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟
14. 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟
15. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板）
1. 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入1×106的细胞
2. 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书）
3. 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
4. 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟
5. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
6. 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟
7. 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清
8. 加入一定体积的纯化抗体，混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书）
9. 1000rpm 离心5分钟
10. 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟
11. 弃上清，加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟
12. 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟
13. 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测