产品信息

产品简介

本试剂盒利用玻璃纤维膜可逆吸附核酸的特性，能够从100-200 mg新鲜或冷冻粪便样本中快速、可靠地分离高质量完整的基因组DNA，搭配独特的裂解缓冲体系，可有效地消除粪便样本中的腐殖酸、多糖、酚类化合物和酶抑制剂，纯化后的DNA适用于YCR、酶切和杂交等下游分子生物学技术。

储存与运输

Proteinase K和RNase A冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其它试剂室温运输及储存，有效期12个月。

组成

使用前须知（请仔细阅读）

1. 请提前准备70℃的水浴或加热块。

2. 若试剂出现沉淀，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

3. 请在使用前向Buffer SGB中加入30 mL异丙醇，向Buffer YGD中加入18 mL无水乙醇，向Buffer YW中加入49 mL无水乙醇。

操作步骤

1. 称量100-200 mg粪便样本至2 mL离心管中，并将离心管置于冰上（若样本为液态，可吸取200 μL转移至离心管中）；

2. 向离心管中加入600 μL Buffer SLA、15 μL Proteinase K和0.25 g研磨珠（1 mm），推荐使用研磨仪（YWE-FP）研磨（60 Hz，运行30 s，暂停10 s，研磨5次）至匀浆，或使用涡旋仪间歇震荡1 min；

3. 70℃孵育15 min，期间涡旋振荡2-3次（如果从革兰氏阳性菌中分离DNA，可将孵育温度提高至95℃）；

4. 12,000 rpm（~13,400×g）室温离心10 min，吸取上清转移至一新的1.5 mL离心管中，注意不要吸取到沉淀；

5. 向上一步所得的上清中加入10 μL RNase A，涡旋混匀，室温孵育5 min，再加入0.3倍上清体积的Buffer SLB，涡旋混匀，冰浴5 min；

6. 12,000 rpm（~13,400×g）室温离心5 min，吸取上清转移至一新的1.5 mL离心管中，注意不要吸取到沉淀；

7. 加入等体积Buffer SGB（使用前请确认已添加异丙醇），颠倒混匀（可能会出现沉淀）；

8. 将上一步的混合液全部转入DNA Spin Column中（每次加入量不超过600 µL，若超过600 µL可分批加入），12,000 rpm（~13,400×g）室温离心1 min，弃滤液，将DNA Spin Column放入Collection tube中；

9. 向DNA Spin Column中加入500 μL Buffer YGD（使用前请确认已添加无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）室温离心1 min，弃滤液，将DNA Spin Column放入Collection tube中；

10. 向DNA Spin Column中加入600 μL Buffer YW（使用前请确认已添加无水乙醇，请沿管壁加入Buffer YW，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm（~13,400×g）室温离心1 min，弃滤液，将DNA Spin Column放入Collection tube中；

11. 重复步骤10；

12. 将DNA Spin Column重新置于Collection tube后，12,000 rpm（~13,400×g）室温离心2 min，取出DNA Spin Column置于新的1.5 mL离心管上；

13. 将DNA Spin Column开盖室温放置3-5 min，尽量使残留的乙醇挥发完全；

14. 向DNA Spin Column的膜中央悬空加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，室温静置2 min，12,000 rpm（~13,400×g）室温离心2 min，收集DNA溶液。若要得到更高浓度的DNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至DNA Spin Column中，室温静置2 min，12,000 rpm（~13,400×g）室温离心2 min，再次洗脱DNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

3. 若粪便样本为干样，请将Buffer SLA的加入量增加至1 mL，或减少样本取样量，在加入Buffer SLA后上下颠倒并静置3-5 min，否则会影响DNA得率。

4. 若需要95℃孵育时，请在温度达到95℃后开启一次离心管盖，排出离心管中气体，再盖紧离心管盖，以防止离心管内气体膨胀冲开盖子导致粪便样本飞溅。

5. 部分试剂易挥发或氧化，应避免试剂长时间暴露于空气中，各试剂使用后应及时盖紧盖子。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

附实验操作流程简图

（产品包装升级中，以实物为准。）