Universal Blue Multiplex Probe One-Step RT-qPCR Kit
- 100 rxns
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| Universal Blue Multiplex Probe One-Step RT-qYCR Kit | Y3363-100 | 100 rxns |
产品简介
本产品是使用探针法对靶标RNA序列直接进行实时定量分析的试剂盒。在同一管中，RNA首先逆转录为cDNA，然后再进行多达四重的qYCR反应，避免由于多次开盖造成样品间交叉污染的风险。经过改造的逆转录酶热稳定性显著提高，可对较复杂的模板进行有效逆转，逆转录预混液中还包含有RNA抑制剂，能够有效防止各种来源的RNA的降解。本产品提供的一步法RT-qYCR预混液为2×，其中除了包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、以及其他缓冲成分外，还具有独特的ROX Passive Reference Dye，可兼容多种qYCR仪器。预混液中还包含有观察反应体系是否建立的可视化示踪蓝色染料，防止漏加试剂。
储存与运输
冰袋（wet ice）运输；-20℃保存；有效期12个月。
组成
| Component Number | Component | G3352-100 |
| Y3363-1 | RT Enzyme Mix | 100 µL |
| Y3363-2 | 2×Universal Blue Multiplex Probe One-Step RT-qYCR Mix | 1 mL |
| Y3363-3 | Nuclease-Free Water | 1 mL |
| 说明书 | 1份 | |
操作步骤
1. 反应体系（20 μL）
| Component | Volume | Final Concentration |
| 2×Universal Blue Multiplex Probe One-Step RT-qYCR Mix | 10 μL | 1× |
| RT Enzyme Mix | 1 μL | |
| Forward Primer（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
| Reverse Primer（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
| Probe（10 μM）a | Variable | 0.1-0.5 μM |
| Template RNAb | Variable | as required |
| Nuclease-Free water | To 20 μL |
a.通常引物和探针终浓度为0.2 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
b.模板添加量因模板溶液中存在的靶基因的拷贝数不同而不同，进行梯度稀释研讨适当的模板添加量。推荐模板用量为0.1ng-100ng。
2. 推荐的YCR反应程序（可根据机型适当调整）：
| A. 两步法 | B. 三步法 | ||||||||
| 阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 阶段 | 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 |
| Stage 1 | 逆转录 | 1 | 55℃ | 10 min | Stage 1 | 逆转录 | 1 | 55℃ | 10 min |
| Stage 2 | 预变性 | 1 | 95℃ | 1 min | Stage 2 | 预变性 | 1 | 95℃ | 1 min |
| Stage 3 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec | Stage 3 | 变性 | 40 | 95℃ | 15 sec |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1 mina | 退火 | 55-65℃ | 20 sec | ||||
| 延伸 | 72℃ | 30 seca | |||||||
a.若需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；若需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
注意事项
1. 2×Universal Blue Multiplex Probe One-Step RT-qYCR Mix使用前请上下轻轻颠倒混匀，请勿涡旋振荡混匀，避免产生气泡。
2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。
3. 本制品中含有荧光染料，配制YCR反应液时应避免强光照射。
4. 反应液的配制、分装请使用新的一次性枪头，尽量避免样品间的交叉污染。
5. 为了保证反应成功，请使用高质量的RNA模板。反复冻融的RNA模板会影响扩增，如需多次实验，可分装后进行冻存，减少冻融次数。
适配机型
ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900YT, 7900 YT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500/7500 Fast, ViiA
7™, QuantStudio™ 系列, PikoRealTM Cycler;
Stratagene: Mx3000P®, 3005P™, 4000™;
Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;
Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;
IIIumina: Eco QYCR;
Cepheid: SmartCycler®;
Qiagen Corbett: Rotor-Gene® 系列;
Roche: LightCycler™ 系列;
Takara: Thermal Cycler Dice 系列;
Analytikjena: qTOWER 系列;
杭州博日: LineGene 系列。
产品仅供科研用途，不用于临床诊断！
（产品包装升级中，以实物为准。）
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 | 操作 |
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