产品信息

产品简介

Peptide-N-Glycosidase F简称PNGase F，来源于Chryseobacterium miricola的糖苷酶F，由大肠杆菌重组表达，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。主要用于去除蛋白质的N糖基化。

来源：来源于Chryseobacterium miricola，大肠杆菌重组表达；

酶活定义：在37℃条件下，1 h将10 μg变性的RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需的酶量定义为一个酶活单位；

纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度＞95%；内源性核酸残留量＜1 pg/μL（qPCR检测）；500 U/μL；

失活或抑制：75℃加热10 min即可失活；

酶存储buffer：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5；

10х Denaturing Buffer：5% SDS，400 mM DTT；

10х Native Buffer：400 mM sodium Phosphate，pH 7.5；

图1. 用PNGase F处理底物RNase B去糖基化效果图。底物RNase B变性处理后，取10 μg分别加入不同酶量的PNGase F（0、10、1、0.5、0.1 U），37℃孵育1 h后全部PAGE电泳检测。

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤

1. 变性条件下蛋白质去糖基化：

在1-20 μg蛋白质样品中加入1 μL 10х Denaturing Buffer和dH₂O至10 μL反应体系，体系在100℃中孵育10 min。待反应体系温度恢复常温后，再加入2 μL 10х Native Buffer、2 μL 10% NP-40、1 μL PNGase F和适量dH₂O至20 μL反应体系，37℃孵育1 h。（注：PNGase F的活性会受到SDS抑制，因此在变性条件下必须加入NP-40）

2. 非变性条件下蛋白质去糖基化：

在1-20 μg蛋白质样品中加入2 μL 10х Native Buffer、2-5 μL PNGase F和适量dH₂O至20 μL反应体系，37℃孵育4-24 h。（非变性条件下蛋白质去糖基化需要更长的反应时间或更多的酶）

注意事项

1. PNGase F的活性会收到SDS抑制，因此在变性条件下必须加入NP-40。

2. 评估蛋白质去糖基化的程度，最简单的方法是通过SDS-PAGE凝胶电泳检测。

3. 酶的取用都应放在冰盒内，使用完毕后立即存储于-20℃。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！

（产品包装升级中，以实物为准。）