产品信息

产品简介

本产品是一种环氧活化的琼脂糖微球，主要用于含氨基、巯基和羟基的蛋白或多肽等生物分子固定，也能与有机小分子等进行高效偶联反应。预活化填料可以根据需要制备成特殊的亲和介质，快速有效的从复杂体系中一步纯化相应的物质。

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储存与运输

常温运输；2-8℃保存，12个月有效期。

组成

操作步骤（以偶联蛋白为例）

A. 自配试剂准备：

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.45μm滤膜过滤，推荐一科自产实验室专用纯水（货号：Y4712）；

偶联液：0.1 M Na₂CO₃,pH8.5-10.0；

封闭液：1 M 乙醇胺，pH8.0

清洗液1：0.1 M 乙酸-乙酸钠，0.5 M NaCl，pH3.0

清洗液2：0.1 M Tris-HCl，0.5 M NaCl，pH8.0

保护液：含20%乙醇的1×PBS

备注：以上试剂可根据客户实际需求进行调整，偶联液需采用碱性Buffer，且不含氨基成分

B. 反应前准备：

a) 待偶联蛋白用偶联液溶解或透析，浓度不低于3mg/mL；

b) 取适量的琼脂糖环氧基活化填料（SweAgarose Epoxy Activated），去除保护液，纯水清洗三次，偶联液清洗一次，去除上清备用，碱性环境中环氧基不稳定，建议立即进行偶联；

C. 填料与生物配体的共价偶联：

a) 将溶解好的样本加入到去除上清的填料中，填料：样品溶液体积比约为1：1-2；

b) 37℃偶联3 h或25℃偶联24 h（反应温度与时间可根据实际条件确定，理论上增加偶联温度延长反应时间可增强偶联效率），偶联期间保持填料的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；

c) 反应完毕后收集偶联样品，以便检测偶联效率，偶联液清洗一遍；

d) 加入填料等体积的封闭液，37℃反应1 h封闭磁珠表面未反应的活化基团，该期间保持填料的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；

e) 反应完毕后用纯水清洗填料，清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复冲洗2次，然后保存在等体积的保护液中，于1-8℃保存，后续可进行下游应用。

注意事项

1. 冷冻、干燥和高速离心等操作会引起填料团聚，不易于重悬和分散，并且影响表面功能基团的化学活性，离心转速不要超过8000rpm，离心时间不要超过5min。

2. 本产品保存在100% 1,4-二氧六环中，使用前用纯水或缓冲液洗涤2-3次，以去除保存液中的1,4-二氧六环。

3. 在偶联过程中保证填料悬浮，否则会影响偶联效率

产品仅供科研用途，不用于临床诊断！