产品信息

产品简介

Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白；Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)结合；经重组改造的Protein A、G与凝胶以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化；Protein A凝胶适合于结合human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b等，而Protein G凝胶适合于结合human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c等多克隆抗体（具体信息见附表一）。

本产品采用自主研发生产的Protein A/G蛋白标记凝胶，与市场上同类产品相比，该产品结合抗体效率更高，非特异性结合率更低，配合优化后的缓冲液，可便捷高效的进行免疫沉淀实验；可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中目标蛋白的分离与纯化。

产品信息：

储存与运输

冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，12个月有效期。

组成

实验准备

抗体纯化相关试剂配方参考如下，用户可根据具体实验情况自行调整

手动操作步骤（以纯化小鼠腹水IgG为例）

1. 样本处理：取腹水样本500 μL，不足的加入结合洗涤液补足500 μL，若样本中有较多蛋白沉淀离心后取上清进行实验，可提高抗体纯度；

2. 凝胶预处理：将抗体纯化凝胶涡旋振荡30 s，使其充分重悬，取100 μL 50%（v/v）SweAgarose Protein A/G抗体纯化琼脂糖凝胶置于另一新1.5 mL YP管中，6000×g在4℃离心30s，吸除上清，用1 mL结合洗涤液洗涤2次，离心分离后弃上清；

注意：凝胶量可根据样本中抗体含量调节；

3. 抗体吸附：向步骤2凝胶中加入步骤1处理的样本，涡旋混匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手动轻柔翻转YP管，使凝胶与样本充分接触，翻转15 min后，6000×g在4℃离心30s，吸除上清液；

4. 凝胶洗涤：向YP管中加入1 mL结合洗涤液，振荡重悬后，6000×g在4℃离心30s，弃上清，重复操作3次；

5. 抗体洗脱：在上述完成凝胶洗涤的YP管中加入 0.5~1.0 mL洗脱液，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转YP管，翻转10 min后，6000×g在4℃离心30s，收集上清液至新的YP管。

6. 抗体中和：在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的中和液，一般为抗体洗脱体积的1/10（例如抗体洗脱液为500 μL，则中和液的添加量为50 μL），最终使洗脱的抗体pH 值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活；

7. 凝胶后处理：使用后的凝胶用洗脱液洗涤2次，6000×g在4℃离心30s，弃上清液；接着用结合洗涤液洗涤3次，6000×g在4℃离心30s，弃上清液，加入200 µL保存液重悬凝胶，置于2~8℃保存。

注意事项

1. 进行抗体纯化前，请务必认真阅读本操作说明书。

2. 凝胶请勿冷冻或者离心，以免引起凝胶不可逆聚集。

附表一

（产品包装升级中，以实物为准。）

仅供科研用途，不可用于临床诊断！