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人胚肾细胞(AAV-293)培养基套装

¥1200
货号:YTCC10324P
品牌:YIKE
规格:
数量:

1、产品描述:

细胞名称:

人胚肾细胞

种属来源:

组织来源:

简介:

AAV-293源自普遍使用的 HEK293细胞株,但产生的病毒滴度更高。HEK293细胞是剪切过的腺病毒5型DNA转染的人胚肾细胞。跟HEK293细胞一样,AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因,当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒,pAAV-RC,和E1缺失助质粒)时,可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。

细胞形态:

上皮细胞样

生长特性:

贴壁生长

生物安全等级:

1级

推荐传代比例:

0.25 %含 EDTA 胰酶,RT 30s-1 min,干消,1:10 传,4 天长满

推荐换液频率:

2-3次/周

生长培养基:

DMEM-H+10 %FBS;(推荐培养基:一科DMEM-H培养基,货号:G4511;胎牛血清(优级),货号:G8002-100ML)

冻存条件:

FBS 90 %+DMSO 10 %,液氮保存

培养条件:

温度:37 ℃;CO2:5 %

注意事项:

该细胞贴壁松散,操作时请尽量轻柔;换液时需预热培养基;收货如有大块脱落的细胞团,为正常现象,请按照收货注意事项处理。

2、细胞图片:

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细胞收货注意事项

1、收到常温细胞后,请及时检查外包装是否完好,细胞培养瓶是否损坏、漏液,培养基是否浑浊,并拍照记录,如有发生,请及时与我们联系。

2、镜下观察有无微生物污染现象,并拍照记录,如有发生,请及时联系我们。

3、75 %酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外表面,置于37 ℃,5 % CO2培养箱中静置培养2-4 h。如果当天无法操作的,请常温(25 ℃)放置,第二天需及时处理,不要放培养箱或冰箱过夜

4、显微镜下观察细胞生长情况,拍照记录不同倍数(100×、200×、400×各3张)镜下细胞状态,并反馈给我们,方便后续售后处理。

5、观察细胞密度若超过80 %则可正常传代处理有的原代细胞不可传代,请根据实际情况决定),首次传代推荐比例1:2(按实际收货细胞密度决定);若细胞密度不到80 %则可预留6 mL左右原瓶培养基继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。

6、由于气温,运输等影响造成贴壁细胞漂浮的,请将细胞离心收集后在离心管中加入1-2 mL胰酶,轻轻吹打重悬,适当时间后加入适量培养基终止消化,再离心并弃去上清,加1-3 mL培养基重悬,最后将细胞悬液转移至新的T25培养瓶中并补充新鲜培养基至5-6 mL,最后置于37 ℃,5 % CO2培养箱中培养。

7、如果订购的悬浮细胞,请摇晃培养瓶,随后将培养液转移至离心管中,离心并弃上清,加1-3 mL培养基重悬,最后将细胞悬液转移至新的T25培养瓶中并补充新鲜培养基至5-6 mL,最后置于37 ℃,5 % CO2培养箱中培养。

8、如果是通过干冰寄送的冻存管细胞,请及时查看泡沫盒内是否还有干冰,冻存管内细胞是否是冻存状态,如无特殊情况请及时解冻复苏培养;若只复苏一支细胞,剩余细胞液氮中保存。

9、细胞收货后尽快拍照留存,以便处理售后问题,若无相关细胞照片,将影响售后服务。

注意:部分细胞由于贴壁松散,会出现运输后漂浮,冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮,属于不可避免因素,正确处理后都可以正常生长



细胞处理

一、培养瓶中细胞操作步骤:

1、对于贴壁培养的细胞,吸出培养瓶中的多余培养基,预留6 mL左右,将细胞置于37 ℃,5 % CO2恒温培养箱中培养。如果细胞已经长满培养瓶,立即传代处理。

2、对于悬浮培养的细胞,将培养瓶中的细胞转移至离心管中,1 000 rpm/min,离心5 min。吸弃上清,用1-2 mL完全培养基重悬细胞,按比例接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

二、冻存细胞操作步骤:

1、将冻存管置于37 ℃水浴中迅速解冻(大约2 min)。为避免污染,确保冻存管口置于水面之上;冻存管中液体融化后,立即取出,75 %酒精喷拭冻存管表面后放入超净工作台中;

2、将冻存管中的液体吹打均匀后转移到含有3 mL完全培养基的YP管中,1 000 rpm/min,离心5 min;

3、离心后吸弃上清,用1-2 mL完全培养基重悬细胞,按比例接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

注意:为保证细胞复苏的存活率,请将培养基在37℃水浴预热后使用。

三、贴壁细胞传代培养(细胞首次传代,建议1:2传代):

1、吸弃原培养液后加入2 mL PBS,轻轻晃动培养瓶清洗细胞,吸弃PBS;

2、加入1-2 mL胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;

3、放入培养箱消化,显微镜下看到瓶中细胞回缩变圆,间隙增大,轻轻摇晃有部分细胞飘动时加入3 mL完全培养基终止消化;吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打,使细胞尽量呈单细胞悬液;

4、收集细胞悬液离心,1 000 rpm/min,离心5 min;

5、离心后吸弃上清,用1-2 mL完全培养基重悬细胞,按比例接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。



温馨提示:

确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。



售后条例

1、收到T25培养瓶寄送的细胞时,如果出现培养瓶破损、漏液,培养基浑浊污染的,请及时拍照记录并于收货当天与我们联系,我们将重发细胞。

2、收到冻存管寄送的细胞时,如果出现泡沫盒已无干冰并且冻存管内细胞处于解冻状态,请及时拍照记录并于收货当天与我们联系,我们将重发细胞。

3、如果收到的T25培养瓶细胞以及按照正规操作复苏的冻存管内细胞,一周内,在正规操作下细胞状态仍然不佳的(请参照细胞发货时的照片),请及时拍照并与我们联系,我们将根据具体情况重发细胞。

4、收到的T25培养瓶寄送的细胞状态良好,如果由于客户自身操作不当造成的细胞状态不佳细胞污染的,我们不予重发细胞。

5、收到细胞后请按照《细胞收货注意事项》及时拍照记录并且反馈给我们,否则将影响售后。

6、请勿擅自丢弃细胞,否则将视为客户自身原因导致细胞出现问题,我们不予重发细胞。

7、本公司售后期为一周,非细胞质量问题,自收货之日起一个月内细胞死亡的,可以申请二次采购,我们将给予一定的折扣。

注:该细胞仅供科研使用!


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注意事项

  • 请在保质期内使用本产品
  • 请存放于阴凉干燥处,避免阳光直射
  • 使用前请仔细阅读产品说明书
  • 如有不适,请立即停止使用并咨询专业人士
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