透射/扫描电镜

透射电镜主要用于观察细胞内部的超微结构，如细胞器、细胞膜、细胞骨架等。扫描电镜可以清楚看到样本表面或者内部某个截面的形貌特征。骨组织一般需观察某截面结构、骨小梁分布、骨细胞、骨髓等。

透射电镜主要用于观察细胞内部的超微结构，如细胞器、细胞膜、细胞骨架等。扫描电镜可以清楚看到样本表面或者内部某个截面的形貌特征。骨组织一般需观察某截面结构、骨小梁分布、骨细胞、骨髓等。

实验注意事项

1. 骨组织及牙齿组织富含有钙质非常坚硬不易制成超薄切片，如需要观察骨组织骨细胞的超微结构需要先行EDTA脱钙液（Y1116）（不建议强酸快脱，对细胞超微结构破坏较为严重）。如果组织块过大脱钙时间过长对细胞超微结构也有较大影响。所以在脱钙前需用专门的切骨机将组织分切（YP2056）成2-3mm厚的薄骨块再进行脱钙，尽量缩短脱钙时间，减少对细胞超微结构的影响。

2. 骨组织及牙齿组织富含有钙质非常坚硬，如需观察内部某一截面结构，需用在目的区域用专门的切骨机将组织分切（YP2056）成2-3mm厚的薄骨块后再进行观察，推荐一科骨组织透射电镜全套服务（YP2084）。

3. 透射电镜取样要求：1-3min取目的区域的骨组织，长度不超过2cm，尽可能用工具将组织切割薄一些控制厚度在3mm左右，减少固定不好引起的实验结果不佳。取好的组织放入电镜固定液室温避光固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4℃时样本可保存1个月左右。

4. 扫描电镜取样要求：1-3min取目的区域的骨组织，长度不超过2cm，用PBS轻轻漂洗，将样本表面的血污，毛发等去掉，将需要扫描的面做好标记或写清楚观察面，放入电镜固定液室温避光固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4℃时样本可保存1个月左右。（样本在电镜取样规定大小范围内可含非磁性金属）。

1. 电镜样本需要 1-3min内取样，取材前可提前准备装有电镜固定液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成小块，取样组织体积控制在以下尺寸(1mmX1mm×1mm正方体、1mm×1mm×3mm长方体状、1mm×2mm×3mm薄片状)

2. 取材时尽量精确到需要观察的目的部位，取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。组织取下后立即投入电镜固定液内室温避光固定2h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4°时样本可保存1个月左右。

3. 对于组织样本要观察病毒等，结果跟样本中数量多少有关，数量少时找不到概率比较大，在选择切片的时候可以多切一些，或者跳切来增加找到的概率。

4. 对于肝脏样本，需要观察肝血窦内皮窗孔，样本需要进行灌注，如果肝脏样本未灌注会导致红细胞挤满血窦无法观察内皮窗口

5. 肝脏样本观察星状细胞，沉积胆汁等，因为数量少，切到的概率比较低，在切片的时候可以跳切多切几张来保证找到的概率。

6. 肠组织观察特络细胞、ICC细胞、肠神经元、肠胶质细胞、M细胞、内分泌细胞等热书细胞，数量少，不易切割，可以进行预实验，跳切多张提高找到的概率

7. 贴壁细胞：贴壁于盖玻片的细胞培养处理完成后弃培养基，用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液室温固定30min，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

8. 悬浮细胞：离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀芝麻至绿豆大小，弃培养基后用PBS轻轻漂洗后，弃PBS加电镜固定液并将细胞吹打开悬浮于固定液内室温固定30min，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

9. 心脏组织观察特络细胞，数量极少不易定位，有观察不到的风险，再制片时候可以跳切多张提高找到的概率。

10. 斑马鱼观察心脏时，心脏较小，定位不好分辨，可以单独取心脏固定，多取几个，提高观察到的概率。