Western Blot Reprobing 实验方法

Western印迹实验后在同一张膜上检测其他蛋白的方法

A.     所需溶液和试剂

注意：所有溶液用Milli-Q或相当级别的水配制。

1. 漂洗液: 1X TBS, 0.1% Tween-20 (TBS/T)
2. 抗体去除液：配制100ml时，取0.76 g Tris碱，2g SDS和700μl β-巯基乙醇，加蒸馏水至100ml。用盐酸调整pH到6.8。

B.      操作步骤：

1. 曝光显影结束以后，把膜用TBS/T清洗4次，每次5分钟。如果膜从没有被晾干，所能够得到的结果是最好的。
2. 将膜浸泡在抗体去除液中，50°C孵育30分钟并轻轻搅动。
3. 把膜用TBS/T清洗6次，每次5分钟
4. （可选）为确认原有的信号已经消失了，将膜用10 ml TBS/T清洗2次，每次5分钟。在膜上滴加1X LumiGLO^®溶液中，室温下孵育1分钟并轻轻晃动。将膜取出并吸走多余的反应底物（但不要使它晾干），包在保鲜膜中然后压上x-光片曝光。
5. 将膜用TBS/T清洗4次，每次5分钟
6. 现在印迹膜又可以重新使用了。继续”Western 免疫印迹方法”中的”膜封闭和抗体孵育”步骤开始新一轮的检测。