BCA蛋白定量试剂盒

 BCA蛋白定量试剂盒
 
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂(DTT，巯基乙醇)和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可用BestBio贝博Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
 
产品组成：
 

使用方法：
A． 96孔酶标板测定：
1.       BCA工作液配制。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。根据样品数量，按体积试剂加体积试剂配制适量工作液，充分混匀。例如试剂加试剂，混匀，配制成工作液。工作液室温小时内稳定。根据样品数量，按体积试剂加体积试剂配制适量工作液，充分混匀。例如试剂加试剂，混匀，配制成工作液。工作液室温小时内稳定。根据样品数量，按体积试剂加体积试剂配制适量工作液，充分混匀。例如试剂加试剂，混匀，配制成工作液。工作液室温小时内稳定。
2.       标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

3.       振荡混匀后，37℃放置30分钟。
4.       用酶标仪测定A562，以不含BSA的光吸收值为空白对照。
5.     以蛋白含量(mg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
6.       样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取20ml样品，加入200ml BCA工作液，混匀后37℃放置30分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A562。
7.       根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8.       计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积20ml，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
 
B． 比色皿测定
        按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。
 
储存条件：
BCA试剂室温保存。蛋白标准-20°C保存。        有效期：一年。
注意事项：
1.     在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。
2.     因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应 的时间和温度，否则如需精确测定，每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯 度和样品均需做复孔。
3.     若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色 没有明显变化，原因可能是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性，参见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。
4.     试剂A 与试剂B 用应密闭保存。
5.      当试剂A 和B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。
6.     使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
 
附表：

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